高效液相色譜系統(tǒng)是應(yīng)用高效液相色譜原理,主要用于分析高沸點(diǎn)不易揮發(fā)的、受熱不穩(wěn)定的和分子量大的有機(jī)化合物的儀器設(shè)備。由以下幾個(gè)部分構(gòu)成:
高效液相色譜系統(tǒng)主要有分析型、制備型和專用型三類。
一般由五個(gè)部分組成:
高壓輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)
1、高壓輸液系統(tǒng):一般由貯液裝置、高壓輸液泵、過濾器、脫氣裝置等組成。
?、?、貯液器:貯液器用于存放溶劑。溶劑必須很純,貯液器材料要耐腐蝕,對(duì)溶劑呈惰性。貯液器應(yīng)配有溶劑過濾器,以防止流動(dòng)相中的顆粒進(jìn)入泵內(nèi)。溶劑過濾器一般用耐腐蝕的鎳合金制成,空隙大小一般為2mm。
②、高壓輸液泵 高壓輸液泵是高效液相色譜系統(tǒng)的重要部件,是驅(qū)動(dòng)溶劑和樣品通過色譜柱和檢測(cè)系統(tǒng)的高壓源,其性能好壞直接影響分析結(jié)果的可靠性。
?、?、脫氣裝置:脫氣的目的是為了防止流動(dòng)相從高壓柱內(nèi)流出時(shí),釋放出氣泡進(jìn)入檢測(cè)器而使噪聲劇增,甚至不能正常檢測(cè)。
2、進(jìn)樣器:
進(jìn)樣器一般要求密封性好,死體積小,重復(fù)性好,保證中心進(jìn)樣,進(jìn)樣時(shí)對(duì)色譜系統(tǒng)的壓力和流量波動(dòng)小,并便于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。
高壓進(jìn)樣閥是目前廣泛采用的一種方式。閥的種類很多,有六通閥、四通閥,雙路閥等。以六通進(jìn)樣閥最為常用。
3、分離系統(tǒng):
色譜分離系統(tǒng)包括色譜柱、固定相和流動(dòng)相。色譜柱是其核心部分,柱應(yīng)具備耐高壓、耐腐蝕、抗氧化、密封不漏液和柱內(nèi)死體積小、柱效高、柱容量大、分析速度快、柱壽命長(zhǎng)的要求。通常采用優(yōu)質(zhì)不銹鋼管制成。
色譜柱按內(nèi)徑不同可分為常規(guī)柱、快速柱和微量柱三類。
常規(guī)分析柱柱長(zhǎng)一般為10~25cm,內(nèi)徑4~5mm,固定相顆粒直徑為5~10mm。為了保護(hù)分析柱不受污染,一般在分析柱前加一短柱,約數(shù)厘米長(zhǎng),稱為保護(hù)柱。
4、檢測(cè)系統(tǒng):
檢測(cè)器的作用是將柱流出物中樣品組成和含量的變化轉(zhuǎn)化為可供檢測(cè)的信號(hào),常用檢測(cè)器有紫外吸收、熒光、示差折光、化學(xué)發(fā)光等。
5、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng):
早期的 HPLC 只配有記錄儀記錄色譜峰,用人工計(jì)算 A或 H。隨著計(jì)算機(jī)技術(shù)的發(fā)展,簡(jiǎn)單的積分儀,可自動(dòng)打印出 H、A和 tR,作一些簡(jiǎn)單的計(jì)算,但不能存儲(chǔ)數(shù)據(jù)。
現(xiàn)在的色譜工作站功能增多,一般包括:色譜參數(shù)的選擇和設(shè)定:自動(dòng)化操作儀器;色譜數(shù)據(jù)的采集和存儲(chǔ),并作“實(shí)時(shí)”處理;對(duì)采集和存儲(chǔ)的數(shù)據(jù)進(jìn)行后處理;自動(dòng)打印,給出一套完整的色譜分析數(shù)據(jù)和圖譜。同時(shí)也可把一些常用色譜參數(shù)、操作程序,及各種定量計(jì)算方法存入存儲(chǔ)器中,需用時(shí)調(diào)出直接使用。