高效液相色譜柱用于快速分離混合極性樣品，與C8或C18柱相比，疏水性較小，通常可使用水相成分高的洗脫液。對(duì)非極性化合物表現(xiàn)了更短的保留時(shí)間，對(duì)極性化合物幾乎沒(méi)有明顯影響。高效液相色譜柱是以液體作為流動(dòng)相的一種色譜分析法，它亦是根據(jù)不同組分在流動(dòng)相和固定相之間的分配系數(shù)的差異來(lái)對(duì)混合物進(jìn)行分離的。氣相色譜中評(píng)價(jià)色譜柱柱效的方法及計(jì)算理論塔板數(shù)的公式同樣適合于高效液相色譜。

　　性能優(yōu)點(diǎn)：

　　1、分離生物分子的理想選擇*封端；

　　2、高覆蓋率，*鍵合，球型硅膠載體，*封端中等的疏水性；

　　3、固定相的疏水性較小；分離特性不同于ODS。

 

　　實(shí)驗(yàn)條件：

　　1、色譜柱1長(zhǎng)15cm，內(nèi)徑4.6mm，裝填10um的C-18烷基鍵合固定相；

　　2、色譜柱2長(zhǎng)15cm，內(nèi)徑4.6mm，裝填5um的C-18烷基鍵合固定相；

　　3、流動(dòng)相甲醇：水(85:15)， 流量0.8ml/min；

　　4、紫外光度檢測(cè)器波長(zhǎng) 254nm，靈敏度0.08；

　　5、進(jìn)樣量5μ1。

 

　　高效液相色譜柱的實(shí)驗(yàn)步驟：

　　1、根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件和實(shí)驗(yàn)錄像指導(dǎo)，按KLC321儀器操作步驟將儀器調(diào)節(jié)至進(jìn)樣狀態(tài)，待儀器流路及電路系統(tǒng)達(dá)到平衡，色譜工作站之“采樣系統(tǒng)”基線平直時(shí)，即可進(jìn)樣；

　　2、吸取5μ1苯、萘、聯(lián)苯的甲醇溶液進(jìn)樣，并用色譜工作站記錄色譜數(shù)據(jù)，同時(shí)記錄色譜數(shù)據(jù)文件名；

　　3、用色譜工作站之“數(shù)據(jù)處理”系統(tǒng)處理數(shù)據(jù)文件并記錄所需數(shù)據(jù)；

　　4、在儀器上測(cè)定色譜柱2的塔板數(shù)，打印色譜圖并比較色譜柱柱效差異。

 

　　數(shù)據(jù)記錄及處理：

　　1、記錄實(shí)驗(yàn)條件。

　　a、色譜柱與固定相；

　　b、流動(dòng)相及其流量、柱前壓；

　　c、檢測(cè)器及其靈敏度；

　　d、進(jìn)樣量；

　　2、記錄色譜峰的保留時(shí)間tR和相應(yīng)色譜峰的半峰寬Y12。

　　3、分別計(jì)算苯、萘、聯(lián)苯在該色譜柱上的理論塔板數(shù)n和理論塔板高度。